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Mientras el mundo sigue sufriendo pérdidas y dificultades debido al brote de COVID-19, causado por un nuevo coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2), los investigadores se esfuerzan por proporcionar equipos de prueba.
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Con este fin, se han diseñado y probado varios métodos de diagnóstico, y un kit de prueba aprobado por la FDA de los EE.UU. utiliza la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real de transcripción inversa basada en la fluorescencia (rRT-PCR). La prueba de rRT-PCR funciona detectando copias replicadas de ácido nucleico del virus del SARS-CoV-2 a través de una sonda de fluorescencia unida que se libera de su homólogo de extinción al replicarse el cebador
Una vez que se toma una muestra apropiada del sistema respiratorio de un individuo, el ARN se aísla y se transcribe en forma inversa en ADN complementario (cADN), que luego se somete al proceso de PCR para amplificar el número de copias de cADN, con varios conjuntos de objetivos de detección de cebadores y sondas del SARS-CoV-2. En los conjuntos de detección de la sonda se incorporan un par de moléculas que se unen en tándem como emisor de fluorescencia y apagador de la oscuridad (no emisivo); la 5(6)-carboxifluoresceína (FAM) como emisor, y el apagador de agujeros negros - 1 (BHQ1) como apagador de la oscuridad (figura 2). Cuando el ciclo de PCR llega a la fase de extensión, la actividad de la nucleasa cebadora de la polimerasa Taq en el extremo 5' rompe el FAM del BHQ-1 en la sonda y su fluorescencia se mide entonces en función de cada ciclo, aumentando su intensidad para los diagnósticos positivos.
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