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Interacciones lipidoproteínas reveladoras por Fluorescence Spectroscopy

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El equipo de investigación de los instrumentos de Edimburgo colaboró con el Dr. Tim Rasmussen, profesor investigador en la universidad de Aberdeen para divulgar sobre la interacción lipidoproteína usando nuestros espectrómetros de la fluorescencia.

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INTRODUCCIÓN

Las interacciones entre los bilayers del lípido y las proteínas de la membrana se pueden revelar registrando la fluorescencia de los residuos del triptófano y el amortiguamiento colisional por los átomos del bromo limitados a las cadenas del ácido graso del lípido. Estas interacciones importantes son lejos más fáciles de detectar usando la fluorescencia que apaga que con otros métodos biofísicos como por ejemplo cristalografía de la radiografía. Eligiendo el sitio del triptófano y la localización del bromo en la cadena del ácido graso, se obtiene la alta especificidad estructural.

MÉTODOS y MATERIALES

Los espectros de emisión fueron registrados en un espectrómetro de la fluorescencia FLS980 equipado de monocromadores dobles de la excitación y de la emisión. Los polarizadores de la calcita fueron utilizados en la excitación y emisión, mientras que un detector del tubo de fotomultiplicador (Hamamatsu, R928P) con la detención 1s fue utilizado. El FLS980 proporciona un instrumento flexible y sensible para registrar la emisión que permite optimizar los ajustes, mientras que los polarizadores son convenientes reprimir los efectos que interfieren con la fluorescencia del triptófano. Por esta razón, los polarizadores se fijan hasta el 90° en la excitación y 0° en la emisión para reducir al mínimo el efecto de la dispersión luminosa.

RESULTADOS - DISCUSIÓN

La estructura cristalina de los MscS demuestra las “paletas inusuales”, considera la inserción del cuadro 3, que parezca ser situado en la membrana y sea probablemente importante para la detección de la tensión. Los MscS son un homoheptamer con las “paletas” en el dominio de la membrana y además un dominio cytosolic grande.

Los espectros del control de las muestras del lípido sin los MscS fueron restados de los espectros crudos y se exhiben en el cuadro 2. Entonces, el amortiguamiento fraccionario era calculado sobre el espectro entero, véase el cuadro 3.